培養(yǎng)基是供微生物、植物和動(dòng)物組織生長(zhǎng)和維持用的人工配制的養(yǎng)料,一般都含 培養(yǎng)基 有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽(包括微量元素)以及生長(zhǎng)素和水等。有的培養(yǎng)基還含有抗菌素、色素、激素和血清。
培養(yǎng)基由于配制的原料不同,使用要求不同,而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后,易被細(xì)菌污染或分解變質(zhì),因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。對(duì)一些需嚴(yán)格滅菌的培養(yǎng)基(如組織培養(yǎng)基),較長(zhǎng)時(shí)間的貯存,必須放在2~6℃的低溫培養(yǎng)箱內(nèi)。由于液體培養(yǎng)基不易長(zhǎng)期保管,現(xiàn)在均改制成粉末。
培養(yǎng)基的配制
1.配料:配方換算→在容器中加入少量水〔蒸餾水,自然水〕→按照配方稱取各種藥品〔依次加入〕→加足所需水量《一藥一勺,取藥后立即蓋上瓶蓋》。
2.溶解:淀粉溶解:少量冷水調(diào)成糊狀加熱溶解,特別是加有瓊脂的培養(yǎng)基,一定要煮沸,瓊脂的熔解溫度95~97℃ ,且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。
3.調(diào)PH:用1N的鹽酸或的1N NaOH把培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到所要求的值。
4.過(guò)濾:濾紙或棉花進(jìn)行過(guò)濾。
5.分裝:一般培養(yǎng)基放在三角瓶或試管中滅菌使用。(1)三角瓶若作靜置培養(yǎng),則100 ml培養(yǎng)基/250 ml的三角瓶,MAX多不能超過(guò)150 ml培養(yǎng)基/250 ml的三角瓶,否則滅菌時(shí)培養(yǎng)基沸騰容易污染棉塞,造成染菌;若作搖瓶培養(yǎng),則15~20 ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,保證通氣良好。(2)試管分裝液體培養(yǎng)基一般裝4~5 ml,約試管的1/4高度;固體斜面培養(yǎng)基一般裝3~4 ml,約試管的1/5高度。
6.包扎:分裝好后,塞上棉塞,在用牛皮紙將棉塞包裹好,防止滅菌時(shí)水份進(jìn)入把棉塞弄濕。
7.滅菌:按配方上要求的溫度、壓力進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高,營(yíng)養(yǎng)成分會(huì)被破壞,培養(yǎng)基中的糖、氨基酸會(huì)使培養(yǎng)基的顏色變深。
8.擺斜面:滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放,使其凝固成為一個(gè)斜面,約占試管長(zhǎng)度的1/2。
9.貯存:培養(yǎng)基在30℃下放置一天,無(wú)污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于4℃低溫培養(yǎng)箱中備用
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