放線菌(Actinom ycete)是以分裂方式繁殖、常形成分枝狀無隔營養(yǎng)菌絲的原核細胞型微生物。大多數(shù)對人不致病,致病的放線菌可分為含有分枝菌酸和不含分枝菌酸兩類:諾卡菌屬含有分枝菌酸;放線菌屬不含分枝菌酸。
一、諾卡菌屬
諾卡菌屬(Nocard ia )有很多個菌種,廣泛分布于土壤中,不屬于人體正常菌群。能引起人和動物疾病的主要是星形諾卡菌(N. asteroides)和巴西諾卡菌(N. brasiliensis)。
(一)生物學(xué)特性
⒈形態(tài)結(jié)構(gòu) 諾卡菌為革蘭陽性桿菌,有細長的分枝菌絲,形態(tài)與放線菌屬相似,但菌絲末端不膨大,在培養(yǎng)早期分枝狀菌絲較少,多為球狀或桿狀;若培養(yǎng)時間延長則可見有豐富的菌絲形成.菌絲呈粗細不等的串珠狀。在患者痰、膿液、腦脊液等標(biāo)本直接涂片中多見纖細的分枝狀菌絲??顾崛旧蹶栃裕娱L脫色時間可失去抗酸性,可與結(jié)核分枝桿菌相區(qū)別。
⒉培養(yǎng)特性諾卡菌為專性需氧菌,營養(yǎng)要求不高,在普通培養(yǎng)基或沙氏培養(yǎng)基上于電熱恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)22℃或35℃均可生長。但繁殖速度慢,一般需1周左右才能形成肉眼可見的菌落,菌落表面干燥、有皺褶或呈顆粒狀,可產(chǎn)生橙紅色、黃色、綠色等不同色素。星形諾卡菌為黃色或深橙色,表面無白色菌絲,巴西諾卡菌菌落表面有白色菌絲生長。在血瓊脂平板上菌落較小、凸起、呈白色。諾卡菌在液體培養(yǎng)基表面形成菌膜,下部液體澄清。
⒊生化反應(yīng)觸酶陽性,分解葡萄糖,大部分菌種水解七葉苷、尿酶和硝酸鹽還原陽性。
(二)臨床意義
諾卡菌屬多引起外源性感染,星形諾卡菌主要通過呼吸道感染引起原發(fā)性、化膿性肺部感染,癥狀類似肺結(jié)核,易通過血行播散,引起腦膿腫、腹膜炎等。若經(jīng)皮膚創(chuàng)傷感染,可侵入皮下組織引起慢性化膿性肉芽腫,形成瘺管。從瘺管中流出的膿液可見小的色素顆粒,為諾卡菌的菌落。巴西諾卡菌可因外傷侵入皮下組織引起慢性化膿性肉芽腫,表現(xiàn)為膿腫和多發(fā)性瘺管,好發(fā)于足、腿部,稱為足分枝菌?。╩ycetoma)。
(三)微生物學(xué)檢驗
⒈標(biāo)本采集采集組織滲出液、痰液、膿液等。
⒉直接顯微鏡檢查尋找標(biāo)本中的色素顆粒,置于載玻片上壓碎,進行革蘭染色和抗酸染色,鏡檢可見有革蘭陽性(有時染色性不定)纖細的菌絲體和長桿菌,抗酸染色呈弱抗酸性若在腦脊液或痰液中發(fā)現(xiàn)抗酸性的長桿菌,應(yīng)注意與結(jié)核分枝桿菌相鑒別。
⒊分離培養(yǎng)將標(biāo)本接種于沙氏培養(yǎng)基和血瓊脂平板上,電熱恒溫培養(yǎng)箱35℃培養(yǎng)2~4天后可見有黃色、橙色或紅色的菌落。星形諾卡菌MAX高生長溫度可達45℃,為本菌鑒定要點之一。
⒋鑒定根據(jù)菌體形態(tài)、菌落特征,進一步作生化反應(yīng)鑒定。星形諾卡菌與巴西諾卡菌的主要鑒別要點:巴西諾卡菌能液化明膠、分解酪氨酸和胨化牛乳,星形諾卡菌均為陰性,星形諾卡菌45℃可以生長,巴西諾卡菌45℃不生長。
二、放線菌屬
放線菌屬(Actinomyces)是寄居在人和動物口腔、上呼吸道、胃腸道和泌尿生殖道中的正常菌群。臨床常見的有衣氏放線菌(A.israelii),黏性放線菌(A.viscosus )、內(nèi)氏放線菌(A.naesluizdii)和溶齒放線菌(A. odontol yticus)等。其中對人致病性較強的主要為衣氏放線菌。牛放線菌(A. bovis)主要引起牛的放線菌病。放線菌多引起內(nèi)源性感染,一般不在人群及人與動物間傳播。
(一)生物學(xué)特性
⒈形態(tài)結(jié)構(gòu)放線菌為直或略彎曲的桿菌,具有多形性,寬可不足1 um,長可達10~50um或更長。有分枝的絲狀體是放線菌屬的重要特征,菌絲斷裂形成長短不一的桿狀,偶見球桿狀或細胞末端膨大的菌體,可單個、成對、呈短鏈或小團狀排列。為革蘭陽性,但著色不規(guī)則,可呈珠狀或條紋狀。無抗酸性,不產(chǎn)生胞子。在膿液標(biāo)本中菌絲纏繞成團,形成“硫黃顆粒”(sulfur granule),它是放線菌在組織中形成的菌落。
⒉培養(yǎng)特性放線菌培養(yǎng)比較困難,厭氧或兼性厭氧,多數(shù)菌種在厭氧環(huán)境生長更好。二氧化碳可促進其生長。在厭氧血瓊脂平板上,37℃培養(yǎng)3~7天后可形成中等大小、光滑或粗糙兩種類型的菌落。①光滑型菌落:圓形、白色、不透明、有光澤的菌落,個別菌種從厭氧環(huán)境移至大氣中可出現(xiàn)紅色菌落。②粗糙型菌落:如腦回狀、臼齒形,或面包屑樣,菌落粘連緊,不易挑起,或易碎。衣氏放線菌在牛心腦浸液瓊脂培養(yǎng)基上,37℃厭氧培養(yǎng)18~24天,形成微型菌落,菌落直徑為0.03~0.06 mm,顯微鏡觀察可見菌落由長短不等的蛛網(wǎng)狀菌絲構(gòu)成,稱為蛛網(wǎng)狀菌落,繼續(xù)培養(yǎng)7~14天后,菌落直徑達0.5~3 mm,呈圓形,白色或灰白色,不溶血,無氣中菌絲,呈臼齒型、面包屑樣菌落,黏于瓊脂表面,不易挑起和乳化。
⒊生化反應(yīng)能分解葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇和麥芽糖,產(chǎn)酸不產(chǎn)氣,水解七葉苷,不水解淀粉,觸酶陰性。牛放線菌與衣氏放線菌的不同之處是水解淀粉,不能將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽。
(二)臨床意義
放線菌常存在干正常人口腔及與外界相通的腔道中,當(dāng)機體抵抗力減弱、口腔衛(wèi)生不良、拔牙或外傷時可引起內(nèi)源性感染,導(dǎo)致軟組織的化膿性炎癥。若無繼發(fā)感染大多呈慢性無痛性過程,并常伴有多發(fā)性瘺管形成,排出“硫黃顆粒”是其特征,稱為放線菌病。
放線菌感染可涉及多種組織器官,如面頸部、胸部、腹部、盆腔和中樞神經(jīng)系統(tǒng)等感染,其中以面頸部感染MAX常見,大多近期有口腔炎、拔牙史或下領(lǐng)骨骨折后頸面部腫脹等,不斷產(chǎn)生新結(jié)節(jié)、多發(fā)性膿腫和形成瘺管。胸部感染常有吸入史,也可由頸面部感染通過血行傳播,開始在肺部形成病灶,損害大多連續(xù)蔓延,可擴展到心包、心肌,并能穿破胸膜和胸壁,在體表形成多發(fā)性瘺管,排出膿液。
(三)微生物學(xué)檢驗
⒈標(biāo)本采集采集局部病灶組織、竇道及瘺管膿液、痰液等,仔細尋找肉眼可見的“硫黃顆粒”。
⒉直接顯微鏡檢查將“硫黃顆粒”制成壓片,在顯微鏡下觀察,可見有放射狀排列的棒狀或長絲狀菌體,邊緣有透明發(fā)亮的棒狀菌鞘,呈菊花狀。用革蘭染色可見中央部分菌絲體為革蘭陽性,分枝狀菌絲排列不規(guī)則,四周放射狀的肥大菌鞘可呈革蘭陰性。膿液涂片中內(nèi)氏放線菌顯微鏡下形態(tài)特征。
⒊分離培養(yǎng)標(biāo)本接種于厭氧血瓊脂平板、牛心腦浸液瓊脂培養(yǎng)基,置于厭氧培養(yǎng)箱、37℃培養(yǎng)。
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